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Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸（phosphatidylserine，簡(jiǎn)稱PS）的一種細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。可以使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光 檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)原理

凋亡早期，細(xì)胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）會(huì)從膜內(nèi)翻到膜外，這是凋亡的一個(gè)典型特征，細(xì)胞凋亡處于早期階段時(shí)，僅有PS外翻，而細(xì)胞膜仍然完整，隨著凋亡進(jìn)程的推移，細(xì)胞除了PS外翻以外，細(xì)胞膜通透性會(huì)改變，可以簡(jiǎn)單的理解成凋亡后期，細(xì)胞膜有穿孔的現(xiàn)象。

Annexin V凋亡檢測(cè)試劑盒一般包含3個(gè)組分：兩個(gè)染料和一個(gè)為Annexin V標(biāo)記提供鈣離子環(huán)境的Binding Buffer。Annexin V本質(zhì)是一個(gè)在鈣離子環(huán)境下，能夠與磷脂酰絲氨酸高度特異性結(jié)合的膜聯(lián)蛋白，通過(guò)在該蛋白上標(biāo)記的熒光基團(tuán)，來(lái)標(biāo)記凋亡細(xì)胞，然后再搭配只能夠進(jìn)入受損細(xì)胞膜的核酸染料，就可以達(dá)到區(qū)分各階段細(xì)胞的目的了。

細(xì)胞分為三類：一是無(wú)PS外翻，也沒(méi)有細(xì)胞膜破裂的健康細(xì)胞（兩個(gè)染料都染不上），二是處于早期凋亡，有PS外翻但是細(xì)胞膜完好的細(xì)胞（可以染上Annexin V-FITC，不能染上PI），三是處于晚期凋亡階段，既存在PS外翻，也存在細(xì)胞膜破裂的晚期凋亡細(xì)胞（兩種染料均可染上）。染完色后通過(guò)流式細(xì)胞儀，就能夠?qū)?xì)胞群體進(jìn)行定量和分析了。

Bioss Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒介紹

產(chǎn)品特點(diǎn)

Bioss自主研發(fā)產(chǎn)品，染色效果優(yōu)于國(guó)際高價(jià)格品牌！
       調(diào)亡細(xì)胞群分群清晰，且細(xì)胞群集中！
       不同檢測(cè)方案，信號(hào)更強(qiáng)更靈敏！
       操作簡(jiǎn)便，省時(shí)又省力，加入PI 后5min可直接上機(jī)檢測(cè)！

BA00101檢測(cè)數(shù)據(jù)

A. 流式細(xì)胞儀分析：

AF488最大激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)519nm；PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)為 535nm， 最大發(fā)射波長(zhǎng)為615nm。用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制散點(diǎn)圖，AF488為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。典型實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞可以分成三個(gè)亞群，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的自發(fā)熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色及紅色熒光雙重染色。

B. 熒光顯微鏡分析：

懸浮細(xì)胞：滴一滴用 AnnexinV-AF488/PI 雙染的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞：可直接用蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。早期凋亡細(xì)胞僅有綠色熒光信號(hào)，晚期凋亡細(xì)胞有綠色及紅色熒光雙重染色。

Annexin V單染(左)、PI單染(中)、Annexin V/PI雙染(右)

Bioss產(chǎn)品與國(guó)際品牌檢測(cè)結(jié)果對(duì)比示例

Protocol:

Jurkat 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，分別經(jīng)過(guò)紫外誘導(dǎo)0秒、15秒、30秒后，繼續(xù)培養(yǎng)4h后加入Annexin V-FITC / PI檢測(cè)。

Result：

Bioss

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